温泉度假娱乐场所温泉水军团菌污染状况及相关因素调查

  1.调查对象:2005年8一9月选择温泉池在30个以上的北京市昌平区内昌平镇北温泉度假村(昌平北)、昌平镇西温泉旅游公司(昌平西)、昌平东部温泉度假娱乐山庄(昌平东1)、昌平东部温泉娱乐宫(昌平东2)4所温泉度假娱乐场所作为调查对象。

 

  2.调查方法与内容:经过培训的调查人员按调查表内容进行开业年限、温泉水加热、过滤、消毒方式、消毒剂的使用情况、环境条件、温泉水循环方式、补换新水及温泉的不同形式进行现场调查,同时用计量检定所检定合格的温度计、酸度计测量水温和pH值,用余氯比色计测定余氯。样品用无菌采水瓶采集出井后储罐水8份、低温池(34一39℃)水42份、高温池(40一47℃)水37份共87份,进行军团菌分离、鉴定和菌落计数。

 

  3.检测方法:取300ml温泉水用过滤膜过滤后30ml蒸馏水洗脱,按照1:1比例进行酸处理,取处理液各0.1ml分别涂布在2个GVPC平板,放COZ温箱37℃培养7d,每天观察菌落生长情况,挑取可疑军团菌的菌落转种在BCYE平板进行分纯培养和血平板进行鉴别培养,血平板不生长而BCYE平板生长,用分型血清进行军团菌分型,另外计数2个GVPC平板的菌落取均值,计算出军团菌的浓度(CFU/ml),最后用PCR方法鉴定嗜肺军团菌或非嗜肺军团菌。

 

  4.菌株分离:军团菌分离用GVPC和BCYE培养基购于北京路桥技术有限责任公司;标准菌株来源于北京市疾病预防控制中心;军团菌分型血清(1一14型)来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。

 

  结果

 

  对象与方法

 

  1.调查对象:2005年8一9月选择温泉池在30

 

  个以上的北京市昌平区内昌平镇北温泉度假村(昌平北)、昌平镇西温泉旅游公司(昌平西)、昌平东部温泉度假娱乐山庄(昌平东1)、昌平东部温泉娱乐宫(昌平东2)4所温泉度假娱乐场所作为调查对象。

 

  2.调查方法与内容:经过培训的调查人员按调

 

  查表内容进行开业年限、温泉水加热、过滤、消毒方式、消毒剂的使用情况、环境条件、温泉水循环方式、补换新水及温泉的不同形式进行现场调查,同时用计量检定所检定合格的温度计、酸度计测量水温和pH值,用余氯比色计测定余氯。样品用无菌采水瓶采集出井后储罐水8份、低温池(34一39℃)水42份、高温池(40一47℃)水37份共87份,进行军团菌分离、鉴定和菌落计数。

 

  3.检测方法:取300ml温泉水用过滤膜过滤后30ml蒸馏水洗脱,按照1:1比例进行酸处理,取处理液各0.1ml分别涂布在2个GVPC平板,放COZ温箱37℃培养7d,每天观察菌落生长情况,挑取可疑军团菌的菌落转种在BCYE平板进行分纯培养和血平板进行鉴别培养,血平板不生长而BCYE平板生长,用分型血清进行军团菌分型,另外计数2个GVPC平板的菌落取均值,计算出军团菌的浓度(CFU/ml),最后用PCR方法鉴定嗜肺军团菌或非嗜肺军团菌。

 

  4.菌株分离:军团菌分离用GVPC和BCYE培养基购于北京路桥技术有限责任公司;标准菌株来源于北京市疾病预防控制中心;军团菌分型血清(1一14型)来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。miP基因特异性引物Lpmip一15几GCAATGTCAACAGCAA一3’;LpmiP一25‘一CATAGCGTCTTGCATG一3’参照文献「l,2〕,PCR试剂TaqDNApolymerase购自华美公司。

 

  1.军团菌检出情况及血清分型:87份温泉水检

 

  出47株军团菌,检出率为54.02%。其中昌平北一所温泉度假村检出率最高为84.38%;昌平西一所温泉旅游公司检出率为48.00%;昌平东两所温泉度假娱乐场所检出率分别为37.50%和14.29%。4所温泉度假娱乐场所储罐内温泉水未检出军团菌。47株军团菌用miP基因进行嗜肺军团菌(LegionellapneomoPhila,Lp)及非嗜肺军团菌分型,全部为Lp。

 

  血清分型分出4个型别:Lpl、Lps、Lp6、Lp12。其中最多为Lpl占57.45%,Lp6占21.28%,Lp12占89%,Lps占6.38%。

 

  2.温泉不同区域的军团菌菌落计数:温泉池的温泉水军团菌菌落数毛10CFU/ml的有n份,高低温泉池分别为6、5份;20份n一100CFUZml高低温泉池水分别为6、14份;>100CFU/ml的有16份中高温池7份,低温池9份。

 

  3.Lp血清型别与水温度关系:4所温泉度假娱

 

  乐场所温泉水温在26一47℃之间。其中低温池42份水样检出Lp26株,检出率为61.90%;高温池37份水样检出Lp21株,检出率56.75%;经统计学处理(丫=0.22,尸>0.05),高温池与低温池Lp检出率的差异无统计学意义;储罐内水温在26一40℃之间共8份水样,均未检出军团菌。检出的47株Lp,其中27株Lpl型的温度范围在34一44℃;10株Lp6型的温度范围在38一44℃;Lps型在39℃检出1株,44℃时检出2株;Lp12型的温度范围36一42℃。34℃以下和44℃以上都未检出Lp。

 

  4.影响因素与军团菌的关系:影响因素包括娱乐场所开业时间、温泉水pH值、环境条件、温泉水加热方式以及消毒方式。4所温泉度假娱乐场所开业时间最短2年,最长10年。昌平北温泉度假娱乐场所开业4年,军团菌检出率高达84.38%,菌落计数>100CFU/ml有n份;开业10年的昌平东2温泉度假娱乐场所军团菌检出率较低(14.29%),菌落计数为零。温泉水pH值6.4一7.3,环境温度26一28℃,但相对湿度比较大均在56%以上。电加热是温泉水保持温度主要方式,锅炉烧蒸汽加热只有一家。温泉场所的消毒全部采用氯制剂,有余氯检测记录,采样时现场测定3家场所余氯含量均在0.3一0.5mg/L之间,但加氯制剂的方式不一样,用氯制剂刷池而没有进一步做温泉水消毒的温泉度假娱乐场所军团菌检出率高,军团菌菌落计数也高;而一家用锅炉烧蒸汽加热余氯含量0.5mg/I曰,其检出率低。